OmicShare Class 基迪奥生物信息在线课堂

温馨提示：请先登陆

基迪奥-喵酱

金牌讲师

空间转录组作为近两年大热的新兴技术，核心突破在于将“空间”与“高通量测序”进行了结合，在保留组织空间位置的同时，获得基因表达特征、表观调控等组学信息，为我们更好的研究组织邻位、微环境基因表达变化提供了快捷便利的分析手段。

高质量样本是空转项目成功开展的关键，今天为大家分享新鲜植物组织样本的冷冻包埋实验方案：

1）组织样本准备

将分离的植物组织置于灭菌水培养皿中清洗。将组织修剪成要求大小后，转移到新的装有灭菌水的培养皿中，冰上放置；

2）组织缝隙填充

将装有植物组织的培养皿转移到真空仪中，冰上抽真空10min；

3）OCT 覆盖组织表面

将植物组织放于培养皿中，用折叠的擦镜纸吸收表面多余水分，加入一些冰上预冷的 OCT ，将组织转移进OCT中。若存在气泡，用移液枪将气泡小心吸去（防止组织表面形成气泡）；

4）包埋盒标记

在包埋盒的四边用记号笔标记方向，并写上样品名称/编号，便于后期包埋完成后，可以记录样本切面的方向；

5）组织置入包埋盒

将组织放入包埋盒中，加入 OCT 完全浸没组织，并确认无气泡（有气泡则用移液器将气泡吸出）。注意：组织放置于包埋盒的时候，我们建议组织切面朝下。如果组织放置后，切面在侧面，则需要记录切面对应的包埋盒侧边编号并告知基迪奥切面的方向编号，便于基迪奥后续可以选择正确的方向制作切面；

6）组织与包埋剂的孵育

组织放入包埋盒后，将其放于冰上孵育10min；

7）样本速冻以及包埋

将包埋盒置于预冷的液氮-异戊烷浴上(冰冻前5min，再将异戊烷放入到液氮中预冷，避免模具被异戊烷浸没)，或者干冰上（异戊烷冷冻效果更佳，是第一选择），等待 OCT 凝固变白；

8）样本保存与运输

冷冻包埋实验结束，将样本用锡纸包好，放置于-80℃超低温冰箱保存，或寄送到公司。

注意事项：

1）组织冷冻过程中避免组织直接接触液氮，引起沸腾，导致速冻不均匀；

2）异戊烷在液氮中放置不宜超过 10min，否则异戊烷会凝固无法完成组织速冻；

3）冷冻包埋盒先做标记，确定包埋盒中的样本名称，包埋后组织不可见，无法记录；

4）组织放入包埋剂时建议目标切面朝下，方便后续切片时寻找目标切面；

5）整个包埋过程避免气泡出现；

6）保存时注意密封，避免组织脱水；

7）制冷媒介优先推荐液氮+异戊烷，快速冷冻可以减少冰晶的形成。建议只有买不到异戊烷的情况下，才使用干冰。

暂无下载