查看: 9896|回复: 19

IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down了解一下?

  [复制链接]

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


发表于 2018.6.1 09:50:59 | 显示全部楼层 |阅读模式
IP、co-IP、ChIP、RIP、pull-down,这么多单词还分得清吗?这些技术能用来做什么都了解过吗?以上几个实验技术都和蛋白有关,他们之间既有联系又有区别。今天小编主要介绍一下这几个实验技术,嗯,都是知识点。

免疫沉淀技术

免疫沉淀技术(Immunoprecipitation, IP)主要原理是根据抗原和抗体的特异性结合,利用抗体将靶标蛋白(即抗原)分离出来,只是为了检测某一种蛋白的表达情况。co-IP、ChIP、RIP等技术由IP演化而来,可以用来研究与蛋白结合的分子。




免疫共沉淀技术

免疫共沉淀技术(co-Immunoprecipitation, co-IP)是一种研究两种蛋白在体内是否存在相互作用的有效方法,通过抗体和已知蛋白结合,从而捕获整个已知蛋白复合物,进而研究复合物中与已知蛋白存在相互作用的蛋白。
IP和co-IP的区别在于检测的最终目标是直接与抗体结合的蛋白,还是间接与抗体结合的蛋白。



染色质免疫共沉淀技术

染色质免疫共沉淀技术(Chromatin Immunoprecipitation,ChIP)是用来研究蛋白质与DNA是否在体内存在相互作用,常用来检测转录因子结合位点。利用抗原抗体的特异性结合,将与目的蛋白相结合的DNA片段沉淀下来,能够真实地反映结合在DNA序列上的调控蛋白。

一般包括:细胞固定---染色质断裂---染色质免疫沉淀---交联反应的逆转---DNA的纯化及鉴定。可以用PCR或者高通量测序鉴定DNA与蛋白质的结合情况。




RNA结合蛋白免疫沉淀技术

RNA结合蛋白免疫沉淀技术(RNA Binding Protein ImmunoprecipitationAssay,RIP)主要是用来研究体内、RNA与蛋白结合情况,利用针对目标蛋白的抗体把相应的RNA-蛋白复合物沉淀下来,通过分离纯化,对结合在复合物上的RNA 进行RT-PCR验证或测序分析。




Pull-down实验

主要原理是利用带有标签的已知蛋白作为诱饵蛋白(最常用的是GST标签,即谷胱甘肽巯基转移酶,glutathione S-transferase),诱饵蛋白特异性结合谷胱甘肽亲和树脂,当目的蛋白溶液过柱时,将诱饵蛋白及其相互作用的蛋白复合物捕获。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳分析两种蛋白间的相互作用,或者筛选相应的目的蛋白。




RNA pull down实验

顾名思义,是研究RNA与蛋白质相互作用的一种技术。利用生物素标记的RNA探针,通过与含有目的蛋白的溶液孵育,形成RNA-蛋白质复合物。
复合物可以特异性结合磁珠,从而与孵育液中的其他蛋白分离。复合物洗脱后,通过蛋白凝胶电泳实验,检测特定的RNA与蛋白的结合情况。



co-IP和pulldown区别

co-IP研究的是体内自然状态下的蛋白质互作,反应地是比较真实的蛋白质之间的相互作用,而pull down则是通过体外实验,无法得知体内真实的结合情况。co-IP由于沉淀下来的是蛋白复合物,所以不能显示蛋白质之间的相互作用是直接还是间接的,而pull down可以确定目的蛋白和检测蛋白是否可以发生直接相互作用。

今天的内容就到这啦~

图片来源:https://cn.bing.com/images/

原文作者 基迪奥 李白      

本帖子中包含更多资源

您需要 登录 才可以下载或查看,没有帐号?立即注册

x
新的一天加油!
回复

使用道具 举报

版主

Rank: 10Rank: 10Rank: 10

主题
62
注册时间
2017.9.21
在线时间
310 小时

突出贡献优秀版主论坛元老


发表于 2018.6.1 11:27:21 | 显示全部楼层
NICE!
New beginning~
回复

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
15
注册时间
2016.7.20
在线时间
535 小时

发表于 2018.6.1 15:34:10 | 显示全部楼层
感谢北神科普蛋白知识
加油
回复 支持 反对

使用道具 举报

迅猛龙

Rank: 8Rank: 8

主题
0
注册时间
2016.1.15
在线时间
261 小时

活跃会员


发表于 2018.6.2 08:47:37 | 显示全部楼层
谢谢分享!
早上好!
回复

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
0
注册时间
2016.5.16
在线时间
238 小时

发表于 2018.6.2 23:02:51 | 显示全部楼层
感谢分享
签到中
回复

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
0
注册时间
2017.11.3
在线时间
173 小时

发表于 2018.6.3 09:10:01 | 显示全部楼层
最近正在做相关实验,谢谢分享!
加油,顺顺利利~!
回复 支持 反对

使用道具 举报

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


 楼主| 发表于 2018.6.4 09:24:24 | 显示全部楼层
pigmorning 发表于 2018.6.1 15:34
感谢北神科普蛋白知识

这个是李白写的
新的一天加油!
回复 支持 反对

使用道具 举报

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


 楼主| 发表于 2018.6.4 09:24:42 | 显示全部楼层
xqywnx 发表于 2018.6.3 09:10
最近正在做相关实验,谢谢分享!

新的一天加油!
回复 支持 反对

使用道具 举报

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


 楼主| 发表于 2018.6.4 09:24:59 | 显示全部楼层
新的一天加油!
回复 支持 反对

使用道具 举报

版主

Rank: 10Rank: 10Rank: 10

主题
33
注册时间
2016.4.7
在线时间
234 小时

发表于 2018.6.4 10:55:21 | 显示全部楼层
这个很好,可以辨清很多概念
我说今晚月光那么美,你说不是的
回复 支持 反对

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
14
注册时间
2017.3.27
在线时间
139 小时

发表于 2018.6.5 09:53:55 | 显示全部楼层
可是我还没弄太清楚,我觉得应该把他们的共同点和不同点列出来
早早早,
回复 支持 反对

使用道具 举报

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


 楼主| 发表于 2018.6.5 10:07:43 | 显示全部楼层
星空 发表于 2018.6.5 09:53
可是我还没弄太清楚,我觉得应该把他们的共同点和不同点列出来

好建议
新的一天加油!
回复 支持 反对

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
13
注册时间
2016.4.28
在线时间
134 小时

发表于 2018.6.5 15:21:23 | 显示全部楼层
感谢楼主,棒棒哒
回复 支持 反对

使用道具 举报

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


 楼主| 发表于 2018.6.6 09:52:56 | 显示全部楼层
小王同学 发表于 2018.6.5 15:21
感谢楼主,棒棒哒

新的一天加油!
回复 支持 反对

使用道具 举报

帝王蝶

Rank: 4

主题
0
注册时间
2016.12.6
在线时间
145 小时

发表于 2019.4.1 21:25:47 | 显示全部楼层
总有大神在身边
good good study, day day up,,,
回复 支持 反对

使用道具 举报

管理员

Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15Rank: 15

主题
200
注册时间
2017.7.3
在线时间
512 小时

活跃会员荣誉管理


 楼主| 发表于 2019.4.4 09:33:22 | 显示全部楼层

新的一天加油!
回复 支持 反对

使用道具 举报

帝王蝶

Rank: 4

主题
0
注册时间
2016.12.6
在线时间
145 小时

发表于 2019.10.16 10:31:47 | 显示全部楼层
总有大神在身边
good good study, day day up,,,
回复 支持 反对

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
2
注册时间
2019.10.25
在线时间
31 小时

发表于 2019.12.6 08:11:51 | 显示全部楼层
好东西。收藏啦~感谢大神
回复 支持 反对

使用道具 举报

帝王蝶

Rank: 4

主题
0
注册时间
2019.11.21
在线时间
12 小时

发表于 2020.1.20 12:04:32 | 显示全部楼层
学习
回复

使用道具 举报

中华鲟

Rank: 5Rank: 5

主题
11
注册时间
2020.3.29
在线时间
26 小时

灌水之王


发表于 2020.4.29 10:31:30 | 显示全部楼层
学习了!
回复

使用道具 举报

您需要登录后才可以回帖 登录 | 立即注册

本版积分规则

快速回复 返回顶部 返回列表