多糖多酚植物RNA提取方法

麦田守望者

1、在2ml无Rnase的离心管中加入810μL提取液和30μLβ-巯基乙醇。

2、取样（100mg左右），液氮充分研磨，将研磨好的样品加入离心管中。

3、充分涡旋至无块状物质，冰浴15min。4℃，12000rpm离心15min。

4、取上清，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），充分涡旋。4℃，12000rpm离心15min。

5、取上清，加入1/3体积的KAc(5M)，充分混匀。4℃，12000rpm离心15min。

6、取上清，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），充分涡旋。4℃，12000rpm离心15min。

7、取上清，加入1/3体积的LiCl(8M)，-40℃沉淀2-3h。

8、4℃，12000rpm离心15min。

9、弃上清，加入1ml75%乙醇洗涤，离心10min。

10、倒掉乙醇，加入1ml75%乙醇洗涤，离心10min。

11、倒掉乙醇，短暂离心，吸去残留乙醇，室温晾干。

12、加入20-40μL无Rnase ddH2O溶解。

13、加入4μL Dnase，5μL 10×Dnase Buffer，2.5μL Rnasin，用无Rnase ddH2O补齐至50μL，37℃水浴30min。

14、反应后，加入450μL无Rnase ddH2O稀释。

15、加入等体积水饱和酚：氯仿：异戊醇（25:24:1），充分涡旋。4℃，12000rpm离心15min。

16、取上清，加入等体积氯仿：异戊醇（24:1），充分涡旋。4℃，12000rpm离心15min。

17、取上清，加入1/10体积的NaAc（3mol/L,PH=5.2）和2.5体积无水乙醇。

18、-40℃沉淀2-3h（-20℃沉淀4h）。

19、4℃，12000rpm离心15min。

20、弃上清，加入1ml75%乙醇洗涤，离心10min。

21、倒掉乙醇，加入1ml75%乙醇洗涤，离心10min。

22、倒掉乙醇，短暂离心，吸去残留乙醇，室温晾干。

23、加入20-40μL无Rnase ddH2O溶解。

注意：

1、氯仿：异戊醇去除蛋白时吸去上清一定要特别注意，不然会引入蛋白污染。

2、最后一步酒精一定要挥发干净，防止酒精污染。

3、经常更换手套。

提取液：

组分	质量/g	终浓度
LiCl	0.593	140mM
Tris	1.21	100mM
PVP	2	2%
SDS	5	5%
EDTA(PH=8.0)	0.3724	10mM
DEPC水定容至100ml，68℃水浴溶解，高温高压灭菌。

KAc:

=29.5ml冰醋酸，固体KOH调PH，DEPC水定容至100ml，PH=4.8

量29.5ml冰醋酸，加入20mlDEPC水至瓶中，然后加入固体KOH片30片（加入过程要缓慢，防止沸腾，该反应为放热反应），调PH至4.8。

LiCl:

50ml DEPC水中加入16.96g LiCl，高温高压灭菌。

DEPC水：

DEPC终浓度为0.1%，高温高压灭菌。

烘箱：

200℃，处理9个小时，仅限金属和玻璃器皿，切勿放入塑料器皿。

塑料器皿用DEPC水浸泡过夜后，锡箔纸包好，高温高压灭菌30min。

NaAc：

称取40.8gNaAc・3H2O置于200ml烧杯中，加入40mlDEPC水溶解，加入冰醋酸调PH至5.2，用DEPC水定容至100ml，室温保存。

麦田守望者

专治各种多糖多酚！

小圆

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doctor125

保存了，感谢！

hx-z-r0924

楼主辛苦了！ 我前段时间找到一个提多糖多酚植物的不错的试剂盒，名字是华越洋  效果很好。我是用来建酵母双杂交文库的  

fengmingfeng89

大公无私，实用

chai1986

保存一下，用的上。谢楼主

御风十三

楼主强大

douya

我们提取过小麦种子的，都是用试剂盒，效果还挺好的

caffemao

能把去除原理给降解下么？比如多糖是用提取液中何种成分在哪一步如何去除的

shuangmu

试试吧

Lizhenshuang

daipengbo1988

感谢楼主分享。适合提取苹果~

daipengbo1988

强势帮顶一波，好人会有好报

daipengbo1988

好人一生平安。

hesen

好帖子，必须鼓励

hesen

好帖，必须鼓励

xiaochenlalala

棒

崔俊丽

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