帝王蝶

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本帖最后由 Miss甄 于 2015-11-14 10:24 编辑
下面是我实验室师兄总结的提植物RNA的方法~分享一下欢迎切磋:lol
液氮研磨材料成粉末(一般液氮挥发不明显时快速研磨->加液氮->再等液氮挥发不明显时快速研磨即可),使用液氮预冷的1ml枪头取不超过0.1g的材料粉末(枪头反面一舀起,基本就够了)送入液氮预冷的2.0ml离心管,加入1ml Trizol提取液,并用枪吹打混匀,剧烈振荡,确保粉末在接触到Trizol溶液前不冻融。 冰上静置5min(样多的情况下,放冰上1h应是不影响)。 加入0.25ml已预冷的氯仿,剧烈振荡,冰上静置5min。 4度,13000rpm,15min。 重复3,4一次。 取上清至已预冷的新离心管,加入2/3体积的预冷的异丙醇,温柔地混匀,冰上静置10min。 4度。12000rpm。10min,会看到管底有非常微量的小白片。 弃上清,用75%乙醇洗涤沉淀2-3次(一般会用枪通过乙醇将沉淀吹起,盖上盖子,温柔摇晃离心管以洗管壁,10000rpm 2min,继续下一次洗涤或者下一步)。 10000rpm,5min,收集沉淀,彻底去除75%乙醇,稍干燥后用适量RNase-free水溶解RNA(一般用30-50ul溶解)。 一般溶解15min后,每管取出微量用于检测后,剩余-75度保存。 电泳。 NanoDrop查看浓度。
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