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[RNA提取] 我总结的trizol提取植物叶片RNA的方法

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帝王蝶

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发表于 2015.11.14 10:22:41 | 显示全部楼层 |阅读模式

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本帖最后由 Miss甄 于 2015-11-14 10:24 编辑

下面是我实验室师兄总结的提植物RNA的方法~分享一下欢迎切磋:lol


  • 液氮研磨材料成粉末(一般液氮挥发不明显时快速研磨->加液氮->再等液氮挥发不明显时快速研磨即可),使用液氮预冷的1ml枪头取不超过0.1g的材料粉末(枪头反面一舀起,基本就够了)送入液氮预冷的2.0ml离心管,加入1ml Trizol提取液,并用枪吹打混匀,剧烈振荡,确保粉末在接触到Trizol溶液前不冻融。
  • 冰上静置5min(样多的情况下,放冰上1h应是不影响)
  • 加入0.25ml已预冷的氯仿,剧烈振荡,冰上静置5min。
  • 4度,13000rpm,15min。
  • 重复3,4一次。
  • 取上清至已预冷的新离心管,加入2/3体积的预冷的异丙醇,温柔地混匀,冰上静置10min。
  • 4度。12000rpm。10min,会看到管底有非常微量的小白片。
  • 弃上清,用75%乙醇洗涤沉淀2-3次(一般会用枪通过乙醇将沉淀吹起,盖上盖子,温柔摇晃离心管以洗管壁,10000rpm 2min,继续下一次洗涤或者下一步)
  • 10000rpm,5min,收集沉淀,彻底去除75%乙醇,稍干燥后用适量RNase-free水溶解RNA(一般用30-50ul溶解)。
  • 一般溶解15min后,每管取出微量用于检测后,剩余-75度保存。
  • 电泳。
  • NanoDrop查看浓度。


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迅猛龙

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发表于 2015.11.27 14:56:19 | 显示全部楼层
提了2年叶片RNA的飘过:'(
我的意中人是一个盖世英雄,有一天他会踩着七彩祥云来娶我……
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钵水母

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发表于 2015.12.8 14:14:28 | 显示全部楼层
我做的材料也是多糖材料,而且多酚含量很高,用TRIZOL法一直没有结果,求大虾给条活路。
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帝王蝶

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发表于 2015.12.8 15:41:53 | 显示全部楼层
多糖多酚类植物材料都不是很好提,感谢分享,让大家在试剂盒之外多一个选择。
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帝王蝶

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发表于 2015.12.12 11:41:32 | 显示全部楼层
正在研究这个,学习了,谢谢大虾!
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钵水母

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发表于 2015.12.14 09:05:01 | 显示全部楼层
多谢分享啦~~~
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钵水母

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发表于 2015.12.25 17:12:41 | 显示全部楼层
以前提RNA都没有跑电泳,那RNA的质量也相当好啊!
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帝王蝶

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发表于 2016.1.21 10:52:57 | 显示全部楼层
谢谢
早上好。。
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钵水母

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发表于 2016.1.21 11:23:49 | 显示全部楼层
没有基因组DNA去除步骤?
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发表于 2016.1.26 18:56:46 | 显示全部楼层
叶片的RNA不好提啊
你好
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帝王蝶

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发表于 2016.4.8 09:49:32 | 显示全部楼层
不错的东东,收藏了,可以试试效果
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钵水母

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发表于 2016.4.17 22:30:59 | 显示全部楼层
自在飞 发表于 2015.12.8 14:14
我做的材料也是多糖材料,而且多酚含量很高,用TRIZOL法一直没有结果,求大虾给条活路。 ...

可以先用trizol提取,再用水饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提一下。
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钵水母

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发表于 2016.4.18 09:11:57 | 显示全部楼层
dqg 发表于 2016.4.17 22:30
可以先用trizol提取,再用水饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1)抽提一下。

好的,我去试试,先谢谢你。
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草履虫

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发表于 2016.4.19 15:29:23 | 显示全部楼层
草莓RNA太难提取了,哪位有好的方法或建议?
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版主

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发表于 2016.4.20 09:35:08 | 显示全部楼层
fengmingfeng89 发表于 2016.4.19 15:29
草莓RNA太难提取了,哪位有好的方法或建议?

这篇博文的博客有姐妹篇。
===
叶片组织,质量要好,就用invitrogen的trizol ,takara的质量可以,但没那么耗
其他材料,如果实等,一般用试剂盒,具体直接联系公司

RNA提取不好一般只有两个问题
1. 提取方法没选对
2. 跑胶
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中华鲟

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发表于 2016.4.21 22:12:31 | 显示全部楼层
多酚多糖类植物的确比较难提
加油
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钵水母

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发表于 2016.4.24 09:51:16 | 显示全部楼层
学习中。。。
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钵水母

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发表于 2016.4.24 09:52:17 | 显示全部楼层
学习了,谢谢
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功夫熊猫

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灌水之王


发表于 2016.5.5 11:37:11 来自手机 | 显示全部楼层
我也是这种方法。
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迅猛龙

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活跃会员突出贡献论坛元老


发表于 2016.5.8 07:56:03 来自手机 | 显示全部楼层
谢谢啦!
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