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[RNA提取] 多糖多酚植物RNA提取方法

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  • TA的每日心情

    2016.3.7 15:36
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    发表于 2016.1.21 11:28:57 | 显示全部楼层 |阅读模式

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    1、在2ml无Rnase的离心管中加入810μL提取液和30μLβ-巯基乙醇。
    2、取样(100mg左右),液氮充分研磨,将研磨好的样品加入离心管中。
    3、充分涡旋至无块状物质,冰浴15min。4℃,12000rpm离心15min。
    4、取上清,加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),充分涡旋。4℃,12000rpm离心15min。
    5、取上清,加入1/3体积的KAc(5M),充分混匀。4℃,12000rpm离心15min。
    6、取上清,加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),充分涡旋。4℃,12000rpm离心15min。
    7、取上清,加入1/3体积的LiCl(8M),-40℃沉淀2-3h。
    8、4℃,12000rpm离心15min。
    9、弃上清,加入1ml75%乙醇洗涤,离心10min。
    10、倒掉乙醇,加入1ml75%乙醇洗涤,离心10min。
    11、倒掉乙醇,短暂离心,吸去残留乙醇,室温晾干。
    12、加入20-40μL无Rnase ddH2O溶解。
    13、加入4μL Dnase,5μL 10×Dnase Buffer,2.5μL Rnasin,用无Rnase ddH2O补齐至50μL,37℃水浴30min。
    14、反应后,加入450μL无Rnase ddH2O稀释。
    15、加入等体积水饱和酚:氯仿:异戊醇(25:24:1),充分涡旋。4℃,12000rpm离心15min。
    16、取上清,加入等体积氯仿:异戊醇(24:1),充分涡旋。4℃,12000rpm离心15min。
    17、取上清,加入1/10体积的NaAc(3mol/L,PH=5.2)和2.5体积无水乙醇。
    18、-40℃沉淀2-3h(-20℃沉淀4h)。
    19、4℃,12000rpm离心15min。
    20、弃上清,加入1ml75%乙醇洗涤,离心10min。
    21、倒掉乙醇,加入1ml75%乙醇洗涤,离心10min。
    22、倒掉乙醇,短暂离心,吸去残留乙醇,室温晾干。
    23、加入20-40μL无Rnase ddH2O溶解。

    注意:
    1、氯仿:异戊醇去除蛋白时吸去上清一定要特别注意,不然会引入蛋白污染。
    2、最后一步酒精一定要挥发干净,防止酒精污染。
    3、经常更换手套。

    提取液:
    组分
    质量/g
    终浓度
    LiCl
    0.593
    140mM
    Tris
    1.21
    100mM
    PVP
    2
    2%
    SDS
    5
    5%
    EDTA(PH=8.0)
    0.3724
    10mM
    DEPC水定容至100ml,68℃水浴溶解,高温高压灭菌。

    KAc:
    =29.5ml冰醋酸,固体KOH调PH,DEPC水定容至100ml,PH=4.8
    量29.5ml冰醋酸,加入20mlDEPC水至瓶中,然后加入固体KOH片30片(加入过程要缓慢,防止沸腾,该反应为放热反应),调PH至4.8。

    LiCl:
    50ml DEPC水中加入16.96g LiCl,高温高压灭菌。
    DEPC水:
    DEPC终浓度为0.1%,高温高压灭菌。

    烘箱:
    200℃,处理9个小时,仅限金属和玻璃器皿,切勿放入塑料器皿。
    塑料器皿用DEPC水浸泡过夜后,锡箔纸包好,高温高压灭菌30min。
    NaAc
    称取40.8gNaAc・3H2O置于200ml烧杯中,加入40mlDEPC水溶解,加入冰醋酸调PH至5.2,用DEPC水定容至100ml,室温保存。

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  • TA的每日心情

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     楼主| 发表于 2016.1.21 11:29:43 | 显示全部楼层
    专治各种多糖多酚!
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  • TA的每日心情
    忙~
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    推广达人宣传达人论坛元老


    发表于 2016.1.22 11:27:51 | 显示全部楼层
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    事在人为~
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  • TA的每日心情

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    发表于 2016.4.9 18:00:52 | 显示全部楼层
    保存了,感谢!
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  • TA的每日心情

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    发表于 2016.4.11 21:23:44 | 显示全部楼层
    楼主辛苦了! 我前段时间找到一个提多糖多酚植物的不错的试剂盒,名字是华越洋  效果很好。我是用来建酵母双杂交文库的  
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  • TA的每日心情

    2016.4.19 15:05
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    [LV.1]初来乍到

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    发表于 2016.4.19 15:15:51 | 显示全部楼层
    大公无私,实用
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  • TA的每日心情

    昨天 08:29
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    [LV.10]以坛为家III

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    灌水之王


    发表于 2016.5.9 11:06:08 来自手机 | 显示全部楼层
    保存一下,用的上。谢楼主
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  • TA的每日心情

    2016.7.20 21:09
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    发表于 2016.5.18 22:14:06 | 显示全部楼层
    楼主强大
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  • TA的每日心情

    2016.10.22 20:55
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    [LV.3]偶尔看看II

    钵水母

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    发表于 2016.6.5 22:11:48 | 显示全部楼层
    我们提取过小麦种子的,都是用试剂盒,效果还挺好的
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  • TA的每日心情
    yes!
    2018.7.9 18:12
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    发表于 2016.9.16 19:36:41 | 显示全部楼层
    能把去除原理给降解下么?比如多糖是用提取液中何种成分在哪一步如何去除的
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  • TA的每日心情
    吃饭
    2018.6.27 18:00
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    中华鲟

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    发表于 2016.11.4 16:43:04 | 显示全部楼层
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